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PCR技術服務,QPCR技術服務,RT-PCR技術服務

更新時間:2017-08-17      瀏覽次數(shù):1896

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QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即實時熒光定量核酸擴增檢測系統(tǒng),也叫實時定量基因擴增熒光檢測系統(tǒng),簡稱QPCR。

 

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QPCR有以下特點:

檢測時間短,只須45分鐘~1小時10分鐘(試劑各異),而定性PCR須3~4小時,酶免終點定量須6~8小時,熒光終點定量須2~3小時。

操作極其簡單:前處理后,樣本插入儀器一小時后到電腦上來出報告即可,無須開蓋,移樣本(以前方法),避免污染。

結果:定性PCR只能定性,很粗略,終點定量PCR由于只能在40個熱循環(huán)結束后檢測熒光,被測熒光達到飽和導致定量不夠,屬于半定量狀態(tài)。而實時熒光QPCR是在擴增的每時每刻連續(xù)檢測各樣本的熒光值的變化,

聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的zui大特點,是能將微量的DNA大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中兇手所的毛發(fā)、皮膚或血液,只要能分離出一丁點的DNA,就能用PCR加以放大,進行比對。這也是“微量證據(jù)”的威力之所在。由1983年美國Mullis首先提出設想,1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應,即簡易DNA擴增法,意味著PCR技術的真正誕生。到如今2013年,PCR已發(fā)展到第三代技術。1973 年,中國臺灣科學家錢嘉韻,發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的Taq DNA聚合酶,為PCR技術發(fā)展也做出了基礎性貢獻。
PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶zui適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。

 

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