免疫組化染色試劑盒怎么使用-上海信帆為您答疑解惑

更新時(shí)間：2018-12-06

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存儲(chǔ)條件：

2~8℃暗處保存。

試劑盒內(nèi)容：

試劑A（無(wú)色液體）：	10ml/kit封閉用正常羊血清原液（含有15mM NaN3）
試劑B（黃色液體）：	1ml/kit生物素化二抗原液（IgG/Bio）
	SPN：生物素標(biāo)記羊抗兔IgG
	SPN：生物素標(biāo)記羊抗小鼠IgG
試劑C（橙色液體）：	1ml/kit辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素原液（S-A/HRP）

標(biāo)本染色：

1. 石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
2. 3%過(guò)氧化氫孵育5~10分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。
3. 蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘（如需采用抗原修復(fù)，在此步后進(jìn)行）。
4. 5~10%正常羊血清（PBS稀釋）室溫孵育10~15分鐘，傾去，勿洗。
5. 滴加適當(dāng)比例的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜。
6. PBS沖洗，3分鐘×3次。
7. 滴加生物素標(biāo)記的二抗（1%BSA-PBS稀釋），如1:100稀釋，則37℃孵育10分鐘；1:300稀釋，則37℃孵育30分鐘.
8. PBS沖洗，3分鐘×3次。
9. 滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素（稀釋和使用方法同二抗）
10. PBS沖洗，3分鐘×3次。
11. 顯色劑顯色（DAB或AEC）。
12. 自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，封片。

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